С тази първа серия от технически съвети на Phenomenex за работа в хроматографската лаборатория поставяме началото на поредица от съвети за оптимизиране на хроматографските анализи. Те идват от практиката и нуждите на хроматографистите, с които експертите на Phenomenex се срещат ежедневно.
HPLC и UHPLC технически съвет: тънкости за разделянето на енантиомери с помощта на хирални стационарни фази на базата на полизахариди.
Полизахаридните хирални стационарни фази се използват широко при разделяне на енантиомери. Има редица предимства за прилагането на полизахаридните стационарни фази, които включват широкото хирално разпознаване, произтичащо от многобройните хирални места, налични в захарните молекули, използвани за
създаването на тези стационарни фази. Прикачените към тези захарни молекули полярни ароматни групи повишават селективността. Това подобрение предлага поголямо хирално разпознаване в сравнение с хиралните стационарни фази създадени на друга основа.
Полизахаридните фази осигуряват добра гъвкавост по отношение на типа мобилна фаза, с която можете да работите, и позволяват на потребителя да използва режими на разделяне като нормална фаза, полярна органична, обърната фаза и режими на изключване по размер (SFC), всички с една хирална колона. Полизахаридните хирални стационарни фази са устойчиви и предлагат добро натоварване тъй като са създадени на основата на силикагел.
Полизахаридните хирални стационарни фази могат да бъдат нанесени върху силикагелните частици или имобилизирани (ковалентно свързани) с тях. Начина на закрепване на фазите – нанесени или имобилизирани може да повлияе на селективността директно чрез промяна във взаимодействието с фазата, или индиректно чрез възможността за използване на различни разтворители, налични при вас, когато използвате имобилизирана фаза вместо нанесена фаза.
Научете още за стационартните, имобилизираните фази и инжектирането със силни органични разтворители тук.
GC технически съвет: Как да кондиционираме, инсталираме и тестваме газ-хроматографската си колона. Вижте тук.
Кондициониране на газовата колона
- Оставете достатъчно време газът-носител да протича през колоната, за да измести кислорода, който може да е наличен в системата.
- Повишете температурата на колоната до максималната изотермична работна температура, която е посочена във вашия индивидуален протокол за GC колонен тест. Поддържайте тази температура, докато се постигне постоянна базова линия. Времето за кондициониране ще зависи от идентичността на фазата и дебелината на филма, като за по-дебелите филми е нужно повече време за достигане на постоянна базова линия. За да се сведе до минимум времето за престой на инструмента, колоните могат да бъдат кондиционирани през нощта при максималната изотермична температура.
Тестване на инсталирането
- Инжектирайте откриваема незадържаща се проба като напр. метан за FID детектор, за да определите времето на мъртвия обем и линейната скорост на газа при желаната температура на колоната. Настройте налягането на газа за оптимален дебит в зависимост от избора на H2, He или N2.
- Пикът трябва да има идеална форма. Ако не се получи такава инсталацията на колоната е дефектна и трябва да бъде направена отново.
Проверка за течове
Използвайте термометър с накрайник термодвойка, за да проверите за течове. Накрайникът с термодвойката е силно чувствителен към H2, He, и N2 и няма да замърси инструмента или колоната.
Всеки газ-носител, който изтича от колоната ще промени проводимостта на термодвойката. Това води до колебания в показанията за температура и би означавало евентуален теч близо до местоположението на термодвойката. Термометърът с накрайник термодвойка предотвратява възможността за замърсяване на колоната.
Използването на специална течност за откриване на теч не се препоръчва за капилярни колони тъй като съществува риск от засмукване на течността в колоната или ферулите и съответно замърсяване на системата. Вижте целия съвет тук.
SPE технически съвет: Какво количество проба мога да заредя в една колонка за твърдофазна екстркция (ТФЕ)? Това количество зависи ли от концентрацията на аналита в пробата?
Когато се разглежда масата на сорбента, необходима за извършване на екстракция в твърда фаза, е критично да се знае вида на матрицата (серум, плазма, урина, слюнка, храна, речна вода, почва и т.н.). Тази информация ще ви позволи като използвате подходящата таблица за търсене, да се определи масата на сорбента. Таблиците са изготвени, за да отразят относителните нива на интерфериращ ендогенен материал, присъстващ в пробите. Колонката за ТФЕ трябва да има достатъчно капацитет за задържане всички аналити, представляващи интерес, заедно с всякакви ендогенни материали, способни да задържат върху сорбента от същия тип на взаимодействията като аналита. Ако няма достатъчно сорбент, възможно е някои анализирани вещества да преминат незадържани през колонката за ТФЕ по време на зареждане на пробата, което води до по-ниски възстановявания и загуба на последователност на възстановяване между проби. Разберете повече тук.
